心肌活力饮对实验性扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响
- 作者:王仁平等 文章来源:本站原创 点击数: 更新时间:2010/6/19
摘自:2008年11月第15卷第11期《中国中医药信息杂志》(论文)
摘要:
目的 观察心肌活力饮对扩张型心肌病大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响,探讨该药治疗扩张型心肌病的作用机理。
方法 60只动物随机分成6组,除正常对照组外,其余各组大鼠分别腹腔注射阿霉素,制造扩张型心肌病模型。各用药组分别予心肌活力饮、黄芪生脉饮灌胃给药。4周后采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡及凋亡相关基因p53和Fas的蛋白表达。
结果 模型组心肌细胞的凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01),凋亡促进基因p53和Fas的蛋白表达增高(P<0.05)。心肌活力饮(5、10、20 g原药材/kg)组大鼠心肌细胞相关凋亡基因p53和Fas的蛋白表达量比模型组减少(P<0.05或P<0.01),心肌细胞的凋亡率也明显降低(P<0.01)。
结论 心肌活力饮可以减少实验性扩张型心肌病大鼠心肌细胞的凋亡,并且可能是通过抑制心肌细胞相关凋亡基因p53和Fas的表达而发挥此作用的。
扩张型心肌病是一种原因不明的以心腔扩大为特征的心脏病,其临床表现为心力衰竭和心律失常,病死率较高,目前尚无十分有效的治疗方法。心肌活力饮是石家庄长城中西医结合医院自行研制的中药方剂,主要用于扩张型心肌病、心力衰竭的治疗,临床应用疗效显著。本实验在建立扩张型心肌病大鼠模型的基础上应用心肌活力饮,并与阳性对照药物进行比较,旨在进一步探讨该药治疗扩张型心肌病的作用机理。
1 实验材料
1.1 药物和试剂
心肌活力饮(100.5 g原材药/袋),石家庄长城中西医结合医院提供;黄芪生脉饮,浙江新光药业有限公司产品,批号20051139;注射用盐酸多柔比星(阿霉素),浙江海正药业股份有限公司产品,批号050803。
1.2 动物
雄性SD大鼠(二级)60只,体重180~200 g,河北省实验动物中心提供,许可证号为SCXK(冀)2003-1-003,动物饲料亦由该中心提供。
1.3 仪器
FACS420型流式细胞仪,美国BD公司。
2 实验方法
2.1 分组及造模
将大鼠随机分成6组,每组10只,分别为正常对照组、模型对照组、心肌活力饮小剂量组(5 g原药材/kg)、心肌活力饮中剂量组(10 g原药材/kg)、心肌活力饮大剂量组(20g原药材/kg)及阳性药黄芪生脉饮组(7 mL/kg)。
除正常对照组外,其余各组大鼠分别腹腔注射阿霉素(2.5 mg/kg),每周3次,共4周,同时给药组连续灌胃给药,每日1次,容量为1 mL/100 g体重,正常对照组及模型对照组给予等量蒸馏水。
2.2 心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的检测
上述实验结束后,各组大鼠用水合氯醛麻醉(350 mg/kg,腹腔注射),剖取心脏,采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况以及凋亡相关基因p53和Fas蛋白的表达。
取心肌组织2g,70%乙醇固定,剪碎,制备单细胞悬液,同时设阴性对照,以替代一抗,阳性对照只加一抗或只加二抗,碘化丙啶染色,流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡,数据采集为对数(log)方式,应用Expo 32 ADC进行免疫荧光数据分析。计数10 000个细胞,计算凋亡率。
凋亡率(%)=凋亡细胞数/细胞总数×100%
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